부갑상선 호르몬(PTH)는 Amino acid 84개의 Single chain인 Polypeptide로 구성. PTH는 부갑상선의 주세포에서 합성되고 혈중에 분비. N말단은 1∼34로 생물학적 활성이 존재하며 혈중 반감기는 약20분, C말단은 35∼84로 N말단의 생물학적 활성을 유지하고 불활성화를 방지하는 작용을 가지고 있으며 반감기는 약 3시간. PTH의 분비는 Ca과 P이 관여하는데 이들 Ion농도가 감소하면 PTH분비는 촉진.
Intact PTH
Anti-PTH가 Coating된 Tube에 방사성동위원소가 표지된 항체, 그리고 검체 내의 항원을 Sandwich로 결합시키는 고형상법으로 IRMA method이다.
Kit가 바뀔 때마다 Standard의 농도 확인.(변경이 잦다.)
Standard는 바로 제조해서 사용하고, 냉동보관 한다.(냉동과 해동은 한번만)
Coating tube의 Lot. No를 기입한다.
Gamma counter, Pipette(100㎕, 200㎕), Shaker
Total | Standard | Control | Sample |
---|---|---|---|
- | Plain tube를 준비한다. | ||
각 Tube에 200㎕넣는다. | |||
모든 Tube에 125-I-Ab를 100㎕씩 넣는다. | |||
- | Coated bead 1개씩 넣는다. | ||
Multi tube vortexer에서 혼합한다. | |||
실온(15-30℃)에서 22±2시간동안 반응시킨다. | |||
Washing Solution 2ml로 3회 washing한다. | |||
1분 동안 감마선계측기에 계측한다. |
10∼65 pg/ml
간에서 합성, 혈류중에 존재하는 Renin기질(Angiotensinogen)을 절단하여 10개의 아미노산으로된 Angiotensin I을 생성시킨다.
Renin
Bead에 피복된 항체에 검체의 항원과 방사성동위원소에 표지된 항원이 경쟁적으로 반응하는 고상법으로 결합형과 유리형을 분리하는 RIA Method 이다.
Gamma counter, Shaker, Pipette, Hamilton
Total | Standard | Control | Sample |
---|---|---|---|
Medi tube | |||
- | - | tube에 Inhibitor A sol.를 10ul씩 넣는다. | |
각 tube에 Generation Buffer를 20ul씩 넣는다. | |||
각 tube에 200ul씩 넣는다. | |||
1시간 동안 37℃항온수조와 4℃에서 반응시킨다. | |||
각 100ul | - | ||
G.B 20ul | |||
CSS 100ul | |||
모든 tube에 125I-Angiotensin를 100ul씩 넣는다. | |||
- | 모든 tube에 bead를 1개씩 넣는다. | ||
3시간 동안 실온에서 반응시킨다. | |||
물로 3회 세척한다. | |||
1분 동안 감마선계측기로 계측한다. |
참고치 : 0.24∼4.7ng/dl
Chromium 친화성 세포종, Batter 증후군, 울혈성 심부전증, 신혈관성 고혈압, Renin 분비성 신종양 등에서 그리고 월경 주기의 항체기, 임신과 약물로는 Amino glutethimide, Progesterone, Spironolactone 투여시에 Renin은 증가하고 원발성 및 속발성 Aldosterone증, Glucocorticoid responsive aldosteronism, Arnold-Healy 증후군, Liddle 증후군, 17α-hydoxylase 결손증, 11β-hydoxylase 결손증, 저 renin 본태성고혈압증 등에서 감소한다.
100개의 아미노산으로 된 낮은 분자량(11800dalton)을 지닌 단백으로, 정상인의 혈액, 소변, 수액 및 모유에 미량으로 존재하고 있다. 림프구계 세포를 위시한 여러 가지 세포에서 생산되는 데 종양세포에서도 생산이 된다. β2-microglobulin은 일부 세포표면에서 이화대사되고 체액중에도 분비되는 저분자 단백이기 때문에 사구체 기저막을 통과하며 근위세뇨관에서 재흡수 된다. 적혈구를 제외한 거의 모든 유핵세포에 통과하고 세뇨관에서 거의 재흡수, 이화되지만 세뇨관 장애가 있으면 요로 대량 배설되므로 세뇨관 장애의 정도를 평가하는데 가장 좋은 지표로 이해된다.
β2-microglobulin
항체가 Coating된 Bead에 방사성동위원소가 표지된 항원과 검체내의 항원을 경쟁적으로 반응시키는 고형상법으로 RIA method이다.
Gamma counter, Shaker, Manual pipette(10㎕, 100㎕, 200㎕), Proquantum, 연속 분주기(100㎕, 200㎕)
Total | Standard | Control | 혈장, 혈청 | 소변 |
---|---|---|---|---|
- | 100㎕ | 10㎕ | 100㎕ | |
- | 각각 100㎕씩 buffer를 넣는다. | - | ||
모든 Tube에 125-I 200㎕씩 분주한다. | ||||
- | Coated Bead 1개씩 넣는다. | |||
cover덮고 bead가 잠기도록 가볍게 쳐준다. | ||||
실온(15-30˚C)에 2시간 동안 반응시킨다(shaker). | ||||
Proquantum 이용하여 세척한다.(30ml로 2회) | ||||
1분 동안 감마선계측기에 계측한다. |
Serum | Intra-assay | 5.1% |
---|---|---|
Inter-assay | 2.6% | |
Urine | Intra-assay | 4.3% |
Inter-assay | 5.9% |
Serum, Plasma,Fluid는 Standard 단위인 ug/L를 mg/L로 환산하여 Counter에 입력하여 결과를 낸다. 소변검체는 Counter 결과 값에 ×100을 하여 ( )mg/L로 report한다.
혈중 β2-MG는 사구체 여과의 지표로 측정되고, 오줌의 β2-MG는 요세관기능을 잘 반영하므로 요세관성 단백질뇨와 사구체성 단백질뇨의 감별에 측정된다. 악성종양의 종양 표지자로서 광범위하게 측정된다.
요 β2-microglobulin | |||
---|---|---|---|
증 가 | 감 소 or 정 상 | ||
혈중 β2-MG | 증가 | 면역이상(SLE, Sjogren증후군) 악성종양(간암, 소화기암, 악성림프종, 백혈병) |
신장질환(가수체성)만성 및 급성 신장염 |
감소 or 정상 | 신장 질환(세뇨관성) Fanconi 증후군,Wilson병, 골수종 | 정상인 |
분자량은 5800이며 췌장조직의 Langerhans섬의 β-cell에서 합성 분비된다. Preproinsulin에서 Proinsulin, Insulin 순으로 전환된다.
Insulin
Bead 표면에 피복된 항체와 Sample의 항원을 반응시킨 후 동위원소가 표지된 항체를 결합시키고, 고상법으로 결합형과 유리형을 분리 하는 IRMA 방법이다.
Gamma counter, Shaker, Pipette(50㎕), Mixer
Total | Standard | Control | Sample |
---|---|---|---|
- | 각 Tube에 50㎕씩 분주한다. | ||
모든 Tube에 125I-Ab를 50㎕씩 분주한다. | |||
- | 실온에서 2시간 동안 흔들어 준다.(shaker) | ||
물로 세척한다.(5회) | |||
감마선 계측기로 1분 동안 계측한다. |
Inter-assay | Intra-assay | ||||||||||||
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Serum : 2∼25 uIU/ml
Insulin의 전구물질인 Proinsulin을 연결하는 Conneting peptide의 약자. Proinsulin 1분자가 분해되어 Insulin 1분자와 C-peptide의 1분자가 생성된다.
C-Peptide
Tube에 Coating된 Anti-C-Peptide 에 125I-Try-C-Peptide 와 Sample, Standard, Control 속의 C-Peptide 를 경쟁적으로 반응시키고, 고형상법으로 결합형과 유리형을 분리하는 RIA method이다.
Gamma counter, Manual pipette(100 ul), 연속분주기(50 ul), Multi mixer
Total | Standard | Control | Sample |
---|---|---|---|
- | 각 tube에 100㎕씩 넣는다. | ||
모든 tube에 125I-Try-C-peptide를 50㎕씩 넣는다. | |||
- | 실온에서 3시간 반응시킨다. | ||
3회 세척(buffer) | |||
감마선계측기로 1분 동안 계측한다. |
Inter-assay | Intra-assay | ||||||||||||||||||
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분자량은 17,500 Dalton 이다. 153개의 아미노산으로 구성되어 있다. Myoglobin은 산소와 친화성이 큰 Heme 단백으로 주로 심근, 골격근세포의 세포질에 존재한다. 그 작용은 혈중의 산소를 근육조직으로 운반한다. 근세포가 장애를 받으면 Myoglobin은 혈중에 유출하고 요중에도 그대로의 형태로 배설된다. 급성 심근 경색증에서는 CK (Creatine Kinase) 등의 심근효소가 경색의 경과를 나타내는 지표로써 사용되지만 Myoglobin이 신속하게 혈중으로 유출되므로 보다 유용한 검사이다.
Myoglobin
Plain tube에 검체내의 항원과 항혈청, 그리고 방사성동위원소가 표지된 항원이 경쟁적으로 반응하고, PEG로 B/F를 분리하는 원심침전법을 RIA method이다.
다른 Lot. No의 Kit와 혼합해서 사용하지 않는다.
B/F 분리시약은 침전물이 생기므로 사용전에 반드시 흔들어서 침전물이 없는 것을 확인하고 사용한다.
실험 실시전 무조건 10배 희석하여 원액과 10배 희석을 동시에 실험한다.(높은 값을 보이는 검체가 많기 때문)
Tracer와 Anti-serum의 Lot. No를 기입한다.
Gamma counter, Shaker, Manual Pipette, Hamilton
Total | NSB | Standard | Control | Sample |
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- | Zero 125㎕ | 각 Tube에 25㎕씩 넣는다. | ||
모든 Tube에 125I -Myoglobin를 100㎕씩 넣는다. | ||||
- | - | Anti serum 100㎕ | ||
실온에서 1시간 동안 반응시킨다. | ||||
각 Tube에 PEG를 1㎖씩 넣는다. | ||||
20분 동안 원심분리 시킨 뒤 상층액을 흡인한다. | ||||
1분 동안 감마선계측기로 계측한다. |
골의 석회화에 관여하는 Vitamin K의존성 Calcium결합단백질로서 49아미노산으로 구성되어 있고 분자량은 580 Da. 이다. 총 골단백의 1-2% 정도를 함유하고 있고 체내에는 Bone GLA(Gamma carboxyglutamic acid)로 존재한다. Osteocalcin의 합성은 Vitamin K에 의존하여 1.25(OH)D3에 의해 자극된다. Osteocalcin은 조골세포에 의해 합성되며 뼈의 Extracelluar Matrix에 결합된다. 새로 합성된 Osteocalcin의 일부는 순환계로 방출된다. Osteocalcin량과 조직학적으로 증명된 골형성 정도와는 좋은 상관성을 나타낸다. 혈청중 Osteocalcin의 농도는 조골세포의 활성도를 직접적으로 반양한다고 볼수 있다. 그러나 Osteocalcin은 무기물농도에 의존되는에 Hydroxapatite의 형성이 증가되었다면 골의 Paget's dz.로서 Osteocalcinol hydroxaparire와 결합함으로써 혈중이 Osteocalcin level이 증가되는 것을 방해한다. 따라서 Hydroxapatite의 형성이 과도한 상태를 제외하고는 특이도와 민감도가 좋은 골형성의 지표이다.
Osteocalcin
ELSA Coating Tube에 검체의 항원과 방사성동위원소가 표지된 항체를 결합시키는 고상법으로 결합형과 유리형을 분리하는 IRMA Method이다.
Serum 또는 Plasma (Heparin 또는 EDTA 가능, Citrate는 안된다.)
2∼8℃ : 4시간 이내 / -20℃ : 4시간 이상
Gamma counter, Auto tube washing기기, Manual Pipette(50㎕, 300㎕), Shaker
Total | Standard | Control | Sample |
---|---|---|---|
- | 각 Tube에 50㎕넣는다. | ||
모든 Tube에 Ab-125I를 300㎕씩 넣는다. | |||
- | 1분간 Multi-tube Vortexer에서 혼합한다. | ||
실온(18-25℃)에서 2시간±5분 반응시킨다.(shaker) | |||
증류수로 5회 세척한다. | |||
1분 동안 감마선계측기에 계측한다. |
Age | Males(ng/ml) | Females(ng/ml) |
---|---|---|
20 - 30 | 11.3 - 37.0 | 8.8 - 39.4 |
31 - 40 | 10.7 - 34.0 | 7.7 - 31.9 |
41 - 50 | 5.2 - 34.5 | 8.0 - 36.0 |
51 - 60 | 6.3 - 30.7 | 8.0 - 50.5 |
61 - 70 | 8.8 - 29.7 | 12.5 - 55.9 |
결과보고 : 5이하, 250이상(Dilution), 소소점 1자리까지 보고한다.
골흡수의 지표로 골다공증, 갑상선기능항진증 등 내분비질환에 의한 골이영양증, 심부전에의한 골이영양증, 부감상선항진증에 의한 대사성 골질환의 진단에 도움을 준다.
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Anti-ds-DNA(duble standard DNA)는 2개 Chain의 DNA를 말하며, SLE 혈청에서 검출된 항 핵 항체이다. Ds-DNA는 면역성이 약하므로 Ds-DNA를 동물에 접종해도 항체 생산은 되지 않는다. 그러나, SLE 혈청에는 항 Ds-DNA가 고농도로 존재한다. 주혈 편모충의 Crithidia의 세포질내에 있는 환상의 2개 Chain DNA가 항원이 된다.
Anti - DNA
Plain tube에 방사성동위원소가 표지된 항원과 검체의 항체를 반응시키고 B/F를 침전용액으로 분리하는 원심침전법으로 IRMA method이다.
Gamma counter, Shaker, Manual pipette(25, 200, 1000㎕), Hamilton, Aspirator, Centrifuge, 연속분주기
Total | Standard | Control | Sample |
---|---|---|---|
- | 각 tube에 25㎕씩 넣는다. | ||
모든 tube에 125I-DNA를 200㎕씩 넣는다. | |||
Mix, Incubating 2hrs at 37°c | |||
- | Cold precipitating sol. 1㎖ | ||
Mix, centrifuge 15mins at 4°c(2000g) | |||
감마선계측기로 1분 동안 계측한다. |
0∼13 IU/ml
Anti-ds-DNA 항체가 양성이면 SLE를 강하게 시사한다. SLE의 급성 활동성과 병행하여 급성으로 악화전에 증가하기 때문에 치료지침으로 좋은 지표가 된다. Anti ds-DNA 항체는 또한 Lupus 신염 발병에 직접적으로 역할을 한다. 즉, DNA - Anti ds - DNA 항체 복합체가 신사구체에 침착하여 신염을 일으킨다.
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사람의 뇨중 Albumin은 보통의 Dipstick법으로는 측정할 수 없는 농도로써 뇨중의 Microalbumin을 검출하고 정량하는 방법이다. Dipstick법은 Albumin의 분비율이 정상의 10∼20배가 됐을 때조차도 음성이거나 미량의 결과를 보인다. 그리고 임상적으로는 200∼300 ㎍/min이 되어야만 나타난다. Urine내 Albumin 측정법은 신장의 손상된 장소를 밝혀내는데 도움을 주는 다른 방법과 함께 관련되어 사용된다. 당뇨병으로 진단된 환자가 참고치 내의 기준치를 보이는 것은 아마도 그들의 Urine내 Albumin의 수치가 운동으로 인해서 신진대사 조절을 위해 짧은 시간에 배설되어 증가된 것으로 보인다.
- 당뇨병과 본태성 고혈압에 의한 신장 손상의 조기진단 및 예측지표
Albumin
Plain tube에 검체의 항체와 항혈청이 방사성동위원소가 표지된 항원에 서로 경쟁적으로 반응하고 PEG sol.으로 B/F를 분리하는 원심침전법으로 RIA method이다.
Gamma counter, Shaker, Manual pipette, Aspirator, Centrifuge
Total | NSB | Standard | Control | Sample |
---|---|---|---|---|
- | 각 Tube에 25㎕씩 넣는다. | |||
모든 Tube에 125I -Ag를 200㎕씩 넣는다. | ||||
- | - | 각 Tube에 anti serum를 200㎕씩 넣는다. | ||
1분간 Muti-Tube vortexer에서 혼합한다. | ||||
실온에서 30분간 반응시킨다.(shaking) | ||||
Cold precipitating sol 1㎖씩 넣는다. | ||||
1분간 Muti-Tube vortexer에서 혼합한다. | ||||
4℃에서 3000g(3500rpm)로 15분 또는 2800rpm에 30분 동안 원심 분리한다. | ||||
원심분리후 즉시 aspiration 또는 decant한다. | ||||
1분 동안 감마선 계측기에 계측한다. |
0 ∼ 13 ㎍/min
계산(㎍/min) = Dose 값 × Total volume ÷ 1440
Microalbuminuria는 현성 신증이 없어도 Albumin의 뇨중 분비가 증가되는 상태이다. Urine내 Albumin의 높은 수치는 사구체 여과 과정이 지나치게 일어났을때 기대된다.(세뇨관의 재흡수 손상) 소변내 Albumin의 수치는 Insulin 의존성과 비의존성 당뇨병 모두에서 현성 신증으로 발전됨을 암시한다고 증명됐다.
GAD는 분자량이 65,000(GAD 65)와 67,000(GAD 67)인 두개를 동일시한다. GAD 65는 사람의 섬(Islet)에서 발견된 널리 퍼져있는 형태이고, Insulin 의존성 당뇨병의 자가항체에 대한 중요한 대상으로 보인다.
Insulin 의존성 당뇨병은 Insulin에 대한 자가항체와 GAD에 대한 자가항체를 포함하여 각각 다른 순환성의 자가항체가 존재하는 특징이 있다.
GAD autoantibody
Plain tube에 검체의 항체와 방사성동위원소가 표지된 GAD 65항원을 먼저 반응시킨 다음, GAD와 GAD Ab의 합성물을 침전시키기 위해서 고체상의 Protein A를 첨가하고 원심분리한 후, 방사능을 측정하는 RIA method이다.
Gamma counter, Multi mixer, Manual pipette(20㎕), 연속분주기(50㎕, 1000㎕) Aspirator, Centrifuge
Total | Standard | Control | Sample |
---|---|---|---|
- | 각 Tube에 20㎕씩 넣는다. | ||
모든 Tube에 125I GAD II Ab를 50㎕씩 넣는다. | |||
- | 혼합 후 실온에서 2시간 반응시킨다. | ||
각 Tube에 ProteinA를 50㎕씩 넣는다. | |||
혼합 후 실온에서 1시간 반응시킨다. | |||
Cold assay buffer 1㎖(2~8) | |||
혼합 후 4℃에서 30분간 원심분리후 상층액을 흡인하다. | |||
1분 동안 감마선 계측기에 계측한다. |
0∼1 u/ml
1995년에 Insulin으로 치료하는 당뇨질환에서 순환하는 IAA의 존재를 알아냈다. 최근에 이용되는 고도로 정제된 Insulin은 먼저 사용되어진 덜 순수한 약제보다도 면역원이 더 적다. 소의 Insulin은 돼지의 Insulin보다도 면역원이 더 많다. 그러므로 최근에는 돼지의 Insulin이 IAA를 밝히는데 사용되어지고 있다. 혈청내 free IAA의 존재는 Insulin의 측정을 방해하고, IAA의 높은 역가는 Insulin방해를 유발한다.
AIA-100
Plain tube에 검체에 있는 IAA와 방사성 동위원소가 표지된 Insulin이 결합한 다음, 원심침전법으로 B/F를 분리하는 IRMA method이다.
Gamma counter, Shaker, Pipette(100㎕), Water bath, Aspirator, Centrifuge, 연속분주기
Total | Standard(duplicate) | Sample(duplicate) | |
---|---|---|---|
- | 각 Tube에 각각 100㎕분주한다. | ||
모든 Tube에 125I를 100㎕씩 분주한다. | |||
- | 혼합후 37℃항온수조에 2시간 동안 반응시킨다. | ||
각 tube에 PEG를 1㎖씩 넣는다. | |||
혼합후 실온에서 15분동안 반응시킨다. | |||
15분동안 원심분리후 상층액을 흡인한다. | |||
감마선 계측기로 1분 동안 계측한다. |
Standard와 Tracer는 미리 제조하지 말고, 사용해야 하는 당일에 제조하여 쓰고, 바로 필요량 만큼 여러 개로 분주하여 냉동보관 한다.(Tracer의 유효기간과 제조일을 Tube에 반드시 표기한다.) Centrifuge할 때 냉장온도로 반드시 사용해야 하는 필요성은 없지만 25℃이하인 상태에서 할 수 있도록 한다. 결과를 산출할 때 %Total로 계산을 하므로 Total, Con, Sample은 반드시 Duplicate한다.(Kit 재고 파악시 Total도 소모량에 포함시킨다.)
4.8 ± 1.4 % ( 3.4∼6.2 %)
준비 중입니다.
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분자량은 16,000 Dalton 이며, 167 Amino acid peptide로 구성되어 있다. Leptin은 Obese gene으로부터 만들어져서 혈액순환을 통해 Adipocyte에서 분비되는 Hormone이다. Leptin은 음식물이 흡수되는 양에 따라 감소하고, Energy 소비시 증가하며, 몸무게 감소시 촉진된다. 몸무게의 항상성과 Energy 균형 조절인자로써 식욕을 억제하기 위해 지방을 저장하고, 그 크기를 조절하는 중요한 역할을 하고 있다.
Human Leptin RIA
Plain tube에 검체의 항원과 방사성 동위원소가 표지된 항원이 항혈청에 경쟁적으로 반응하고, 원심침전법으로 B/F를 분리하는 RIA method이다.
모든 Reagent (Standard, Control, Anti-serum, Tracer, Precipitating sol.)와 Sample은 냉동보관하며 5회이상 냉동과 해동을 반복하지 않는다. Zero std.가 없으므로 NSB에는 Assay buffer를 300㎕, A에는 200㎕ 그리고 나머지 Std.와 Sample에는 100㎕씩 분주한다. Centrifuge후 즉시 Tube rack을 뒤집어서 최소한 15 ∼ 60초 동안 물기를 제거한다. 또는, 되도록 빨리 Aspiration을 한다.(침전물이 약해서 흐트러지기 쉬우므로 단 한번에 뒤집어야 한다.) ⇒ Tube의 가장자리에 묻어있는 물기를 꼭 제거하여 Counter 오염의 원인이 되지 않도록 한다.
Tracer와 Anti-serum의 Lot. No를 기입한다.
Gamma counter, Shaker, Pipette(100㎕), Mixer, Aspirator, Centrifuge
Total | NSB | Standard | Control | Sample |
---|---|---|---|---|
- | 각 Tube에 buffer를 100㎕씩 넣는다. (NSB는 300㎕, A Std는 200㎕) |
|||
모든 Tube에 125I -human Leptin를 100㎕씩 넣는다. | ||||
- | - | 각 Tube에 anti serum를 100㎕씩 넣는다. | ||
Vortex mix, Incubating 20~40Hrn at 4℃ | ||||
4℃에서 24시간 반응시킨다. | ||||
Cold precipitating sol 1㎖씩 넣는다. | ||||
혼합 후 4℃에서 30분간 원심분리후 상층액을 흡인하다. | ||||
1분 동안 감마선 계측기에 계측한다. |
혈청내 Leptin의 농도는 남자보다 여자에게서 높게 나타나고, 비만시 증가하며 그외 다른 질환에서도 관련이 있지만, 자세한 생리학적인 기능은 잘 알려져 있지 않다.
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